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切向流系统在蛋白质浓缩与缓冲液置换中的应用

添加时间:2025-04-16 11:02:45   浏览次数:27  

蛋白质浓缩与缓冲液置换

应用场景
从低浓度蛋白溶液(如细胞培养上清或粗提液)中去除小分子杂质(盐离子、溶剂等),同时浓缩目标蛋白至所需浓度。

操作流程

  • 膜包选择:根据目标蛋白分子量选择截留分子量(MWCO)合适的超滤膜(例如,30 kDa膜用于浓缩150 kDa的抗体)。
  • 系统组装:组装TFF系统(蠕动泵、膜包、压力表、储液罐),用纯水预冲洗膜包以去除保存剂。
  • 循环浓缩:将蛋白溶液泵入系统,调节蠕动泵转速(例如200 RPM)和背压阀,控制跨膜压力(TMP)在1~3 bar。
  • 缓冲液置换:在浓缩过程中持续添加新缓冲液(透析模式),置换原液中的盐或杂质。
  • 终点判定:通过UV监测(A280吸光度)或体积减少比例(如浓缩10倍)确定终点。

优势

  • 避免传统透析法的长时间等待和低效问题。
  • 可处理大体积样品(如1 L→10 mL),且活性回收率>90%。

注意事项

  • 避免过度浓缩导致蛋白聚集(控制TMP不超过膜耐受极限)。
  • 操作后立即用0.1 M NaOH清洗膜包,防止蛋白残留污染。
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